ساب کلونینگ، بیان و تخلیص استرپتوکیناز

استرپتوکیناز (sk) یک داروی ویژه و موثر در درمان ترومبولایتیک سکته های حاد قلبی می باشد. علی رغم وجود محدودیت های قابل توجه، به دلیل قیمت نسبتا پایین استرپتوکیناز، این پروتئین هنوز یک داروی انتخابی به ویژه در کشورهای کم درآمد می باشد. در بررسی حاضر، تولید و تخلیص استرپتوکیناز با استفاده از وکتور بیانی pet21a(+) مورد ارزیابی قرار گرفته است. برای این منظور ابتدا پلاسمید pet21a(+) که حاوی ژن skc ( بدست آمده از streptococcus equisimilis h46a ) بود ، به میزبان مناسب (e.coli bl21) انتقال یافت. در مرحله بعد شرایط تولید استرپتوکیناز از نظر دما، غلظت های مختلف lactose به عنوان القاء گر و نیز مدت زمان القاء بهینه سازی شد.پس از بهینه سازی شرایط تولید، قسمت عمده پروتئین تام باکتری متعلق به sk ( اسرپتوکیناز) گردید. پس از بررسی sk تولید شده بر روی ژل sds-page.مشخص شد محصول یک اینکلوژن بادی است و نمیتوان فعالیت بیولوژیکی sk خالص شده با استفاده از سوبسترای سنتتیک (s2251) را اندازه گیری کرد. ما در این مطالعه از وکتور بیانی pet21a(+)استفاده کردیم . انتخاب میزبان مناسب برای تولید پروتئین های نوترکیب یکی از مهمترین فاکتورهایی است که بر روی سطح بیان پروتئین مورد نظر تاثیر می گذارد. پیشنهاد می شود از میزبان های دیگر نیز برای این منظور استفاده شود.